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產品名稱:

H9 人胚胎幹細胞(無飼養層)/STR鑒定

產品型號: H9
產品時間: 2020-01-06
描述:H9 人胚胎幹細胞(無飼養層)/STR鑒定
H9 人胚胎幹細胞特性
1) 來源:人胚胎幹細胞
2) 形態:貼壁,呈克隆狀
3) 含量:>1x106 個/mL
4) 汙染:支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
5) 規格:T25瓶或者1mL凍存管包裝
6)用 mTeSR1 培養人胚胎幹細胞(hESC)和人 iPS 細胞(hiPS)

產品介紹

H9 人胚胎幹細胞/STR鑒定(無飼養層)特性

1) 來源:人胚胎幹細胞

2) 形態:貼壁,呈克隆狀

3) 含量:>1x106 個/mL
4) 汙染:支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
5) 規格:T25瓶或者1mL凍存管包裝

運輸和保存

可選擇幹冰運輸及發送複蘇存活細胞方式

(1)幹冰運輸,收到後立即轉入液氮或者-80度冰箱凍存或直接複蘇;

(2)存活細胞,收到後應繼續生長,傳代達到細胞生長狀態良好時,再進行凍存。具體操作見細胞培養步驟。

(3)收到細胞後請拍照,3天內如果發現汙染,請及時拍照與绿巨人全网最好的破解app聚合平台聯係。
 
細胞用途:僅供科研使用。
                       
細胞接收後的處理:
1) 收到細胞後,請檢查是否漏液,如果漏液,請拍照片發給绿巨人破解版无敌版。
2) 請先在顯微鏡下確認細胞生長狀態,酒精消毒瓶壁並將T25瓶置於37℃培養約2-3h。
3) 將T25瓶中的細胞培養基離心後,去上清,添加6ml完全培養基,加入新的T25瓶中繼續培養。
4)   如果細胞長滿80%請及時進行細胞傳代.
 H9 人胚胎幹細胞(無飼養層)/STR鑒定

用 mTeSR1 培養人胚胎幹細胞(hESC)和人 iPS 細胞(hiPS)

1. 試劑和材料

mTeSRTM1 培養基試劑盒(產品號#85850)包括:

成分

規格

存放條件

mTeSRTM1

基礎培養基(#85851)

400

mL

2-8

mTeSRTM1

5X 添加物(#85852)

100

mL

-20

所需的其他試劑和材料

產品

品牌/貨號

Cryostor CS10

STEM CELL/07930

溫和分離液

STEM CELL/07174

DPBS(不含鈣鎂離子)

GIBCO/14190

DMEM/F12

GIBCO/11330

Y27632

STEM CELL/ 72302

BD Matrigel hESC-qualified

Matrix

CORNING/354277(BD 該係列產品已被

CORNING 收購)

細胞刮

如,CORNING/3010

另需細胞培養板/瓶/皿,15ml 離心管和移液管等細胞培養耗材。

 

2. 試劑的製備

2.1 mTeSR1 的製備
2.1.1 在室溫 (15 - 25°C) 下或冰箱內 (2 - 8°C) 過夜解凍 mTeSR
™1 5X 添加物(成分編號 #05852)。 如需要,可在無菌條件下將 5X 添加物分裝為適量的工作等份,並在 -20°C 下凍存。冷凍的分量須在 3 個月內用完。解凍後的分量應在 1 天內製備成完全的 mTeSR™1 培養基。請勿在解凍後再次冷凍。
2.1.2 在無菌條件下將 100 mL 的 5X 添加物全部解凍後加入到 400 mL 的基礎培養基中,形成總共 500 mL 的容量。充分混勻。完全的 mTeSR™1 培養基 在(2 - 8°C) 下儲存時可維持穩定狀態多 2 周,或在-20°C 下冷凍時可維持穩定狀態多 6 個月。在室溫(15 - 25°C) 下或冰箱內(2 - 8°C) 過夜解凍冷凍的培養基,不要長時間放在 37°C 水浴內加熱培養液。
如果在無菌條件下製備,完全的 mTeSR™1 培養基可直接使用,但如需要, 也可使用 0.2 µm 的低蛋白結合過濾器過濾培養基。

2.2 Matrigel 工作液配製和包被

應分裝和冷凍保存 BD Matrigel™ hESC-qualified matrix(BD 產品號
#354277)。有關分裝的完整說明和建議,請查閱與 BD Matrigel™ 同時提供的產品說明書。分裝後的小包裝可在-70°C 下多儲存 6 個月。
將一份BD Matrigel™ 加入到25 mL 的DMEM/F12 中,這足以包被四個6 孔培養板(1 mL/孔)或三個 100 mm 培養皿(8 mL/培養皿)。
(1) 將 25 mL 的稀釋培養基(DMEM/F12;產品號#11330 )分裝入離心管放在冰上。
(2) 將一份分裝後的 BD Matrigel™自-70°C 取出 ,在冰上解凍,直到成為液體,然後將解凍後的 BD Matrigel™ 加入到冷稀釋培養基(在 50
mL 的試管中)中,充分混勻。如需要,可用冷培養基衝洗 EP 管。
(3) 立即用稀釋後的 BD Matrigel™ 溶液包被組織培養板。對於 6 孔培養板,每個孔使用 1 mL 稀釋後的 BD Matrigel™;對於 100 mm 培養板, 每個培養板使用 8 mL 稀釋後的 BD Matrigel™。旋動培養板,以使 BD
Matrigel™ 溶液均勻地分布在表麵上。
要包被其他尺寸的組織培養皿,則按照需要包被的培養皿的表麵積決定稀釋後的 BD Matrigel™用量。
(4) 使用前,包被的培養板應放在培養箱(37°C) 下至少 1 個小時。請勿讓培養板脫水。在培養板可供使用之前,請勿移除 BD Matrigel™ 溶液。
如果不立即使用,培養板必須密封,以防止脫水(如利用 Parafilm®)。包被後的培養板可在 2 - 8°C 下多儲存 7 天。
如果 BD Matrigel™溶液並未完全覆蓋表麵,則無法實現zui佳的 hPSC 培養;因此,不建議使用含有溶液已蒸發區域的培養板。
(5) 輕輕地將培養板向一個角落傾斜,使過剩的 BD Matrigel ™ 溶液匯聚在那個角落。用一次性移液管或通過抽取移除溶液。確保移液槍頭不刮到已包被的表麵。立即加入 mTeSR™1 培養基和細胞。
如果已將培養板在 2 - 8°C 下儲存,則在移除 BD Matrigel™溶液之前, 將培養板在培養箱 (37°C) 下放置 30 分鍾。

2.3 配製 Y27632 溶液

Y27632 粉末溶解在 DPBS 中,配成濃度為 10mM 的儲存液,0.22um 濾膜過濾除菌。分裝後冷凍於-20°C,6 個月內使用。
Y27632 提高複蘇和傳代後的克隆形成率,所以隻在複蘇步驟和傳代步驟添加,換液時不添加 。
 

3. 解凍複蘇 hES /hiPS

在開始操作程序之前,將所有試管、加熱後的培養基和培養板準備好,以確保盡快完成解凍程序。
(1) 快速在 37°C 水浴槽中解凍 hPSC,方法是輕柔持續地搖動冷凍管,直到

隻剩下一個小冷凍團。從水浴槽中取出冷凍管,用 70% 乙醇擦拭,以進行消毒。
(2) 使用一個 1 mL 的移液管將冷凍管中的內容物轉移至一個 15 mL 錐形試管中, 過程必須輕柔防止吹散細胞團。
(3) 將 5 - 7 mL 溫暖的 mTeSR™1 逐滴加入試管中,在加入培養基的同時輕柔混勻。
(4) 在室溫(15 - 25°C) 下,以 300 x g 離心細胞 5 分鍾。
(5) 吸出培養基,使細胞團保持完整。使用一個 1 mL 的移液管,輕輕地將細胞重新懸浮在 1 - 2 mL 的 mTeSR™1 中,確保維持細胞的團塊狀態。根據終培養細胞的液體體積,加入 ROCK inhibitor Y27632, 終濃度為 10uM
(6) 輕輕地將培養板/皿向一個角落傾斜,使過剩的 BD Matrigel™ 溶液匯聚在那個角落,從而從已包被的組織培養板中移除 BD Matrigel™。使用一次性移液管或通過抽取移除溶液。確保移液槍頭不刮到已包被的表麵。
如果已將培養板在 2 - 8°C 下儲存,則在移除 BD Matrigel™溶液之前,將培養板在培養箱 (37°C) 下 放置 30 分鍾。
(7) 將含有細胞聚集體的培養基轉移至 BD Matrigel™ 包被的培養器皿上。一般一支凍存管細胞複蘇到一個 T25 培養瓶或 6 孔板中的 2 個孔。
(8) 將培養板放在 37°C 培養箱中,然後快速地左右、前後移動培養板,以均勻地將細胞團分布在各個孔內。在 37°C、5% CO2 和 95% 濕度的條件下培養細胞。
(9) 每天更換培養基(不需要再添加 Y27632)。在解凍後大約 5 - 7 天內檢查可進行傳代的未分化集落(有密集的中心)。
如果在解凍後僅觀察到很少的未分化集落,則可能需要隻選擇這些集落進行傳代,並將它們重新放在新的 BD Matrigel™包被的培養板大小相同的孔中。
(10) 每天換液。
 

4. 用 mTeSR1 對 hES/hiPS 進行傳代

在 mTeSR™1 中生長的細胞當集落變得較大、中心變得密集和明亮(對比其邊緣)而相鄰的集落開始融合時,這時可進行傳代。根據接種的細胞團的大小和密度,傳代周期為 5 天左右。如果太早對集落進行傳代或傳代太過頻繁,則細胞可能吸附不好、產量將會減少且細
胞可能分化。如果太晚對集落進行傳代,培養物將開始顯示分化跡象(特點是細胞類型出現不同的形態)。
(1) 分裝足夠的 mTeSR™1 以傳代細胞。將分裝的 mTeSR™1、溫和分離液(產品號#07174)和 DMEM/F-12 加熱至室溫( 25°C 左右)。
(2) 使用顯微鏡觀察確定分化的區域。用氈製粗頭筆或透鏡標誌器在培養板底部標記這些區域。如果培養物品質優異,分化的區域不會超過培養孔的 20%。
(3) 用移液槍頭刮除或抽取,去除分化區域。
(4) 從 hPSC 培養物中吸出培養基,然後用 DPBS(不含鈣鎂離子)衝洗。
(5) 向每個培養瓶內加入溫和分離液(每個 T25 加 3ml),覆蓋底麵,在室溫下靜置 1 分鍾。

(6) 吸掉溫和分離液,然後用 6ml DMEM/F-12 輕輕的洗滌培養皿一次。
(7) 向培養瓶內加適量 mTeSR™1,並用細胞刮(如 Corning 產品號#3010)將細胞集落刮離培養瓶底。
(8) 將分離的細胞聚集體轉移至一個 15 mL 錐形試管中,並加入適量 mTeSR
™1 衝洗培養瓶,以收集殘留的細胞聚集體。將衝洗液一並收集到 15 mL 離心管內。
輕輕吹打細胞聚集體 2-3 次,調整培養基的體積,以實現適當的分配。根據終培養細胞的液體體積,加入 ROCK inhibitor Y27632, 終濃度為 10uM。
(9) 將細胞聚集體與 mTeSR™1 接種至新的 BD Matrigel™ 包被的培養板上。一般傳代周期為 5 天左右,傳代比例為 1:3-1:6。如果集落過於密集或過於稀疏,則下一次傳代時相應地調整傳代比例。請注意,這些指導基於中科院幹細胞庫 hESC H1 和 H9 以及 hiPS DYR0100 和 DYP0530 細胞係的生長特征,在其他不同的細胞係和實驗室之間可能會存在差異。
(10) 快速前後和左右多次移動培養板,以使細胞分散在各個孔的表麵。將培養板放在 37°C 培養箱中。確保新接種的集落均勻地分布在 BD Matrigel
™包被的培養板的整個表麵。細胞團分布不均勻有可能導致 細胞分化。
(11) 每天換液。

5. 冷凍 hESC 或 hiPS 細胞

(1) 用顯微鏡觀察需要凍存的培養物,確定已分化的區域。用氈製粗頭筆或透鏡標誌器在培養板底部標記這些區域。
如果培養物品質優異,分化的區域不會超過培養孔的 20%。
(2) 用移液槍頭刮除或抽取,去除分化區域。
(3) 從培養孔中吸出殘留的培養基,然後用 DPBS(不含鈣鎂離子)衝洗。
(4) 向每個培養瓶內加入溫和分離液(每個 T25 加 3ml),覆蓋底麵,在室溫下靜置 1 分鍾。
(5) 吸掉溫和分離液,然後用 6ml DMEM/F-12 輕輕的洗滌培養皿一次。
(6) 向培養瓶內每個孔內加適量 mTeSR™1,並用細胞刮(如 Corning 產品號
#3010)將細胞集落刮離培養瓶底。
(7) 將分離的細胞聚集體轉移至一個 15 mL 錐形試管中,並加入適量 mTeSR™1 衝洗培養瓶,以收集殘留的細胞聚集體。將衝洗液一並收集到 15 mL 離心管內。小心地盡量將細胞團保持到大。
(8) 在室溫(15- 25°C) 下,以 300 x g 離心裝有細胞聚集體的 15 mL 離心管
5 分鍾。離心細胞時,準備和標記凍存管。
(9) 輕輕地吸出上清液,小心保持細胞團完整。
(10) 使用預冷的(2 -8°C) CryoStor™CS10 輕輕地重新懸浮細胞團,然後將細胞懸液轉移至冷凍管中。
(11) 將冷凍管置於程序降溫盒內(大約-1°C /min)-80°C 冷凍細胞過夜, 然後轉移至液氮長期儲存。

绿巨人破解版在线观看(上海)生物技術股份有限公司主要產品和技術服務:

一、原代細胞服務
       各類模式哺乳動物的多種原代細胞資源;
       多種人源性正常及腫瘤原代細胞資源;
       原代細胞分離和培養相關試劑、kit、培養基添加劑等;
       原代細胞相關技術服務和整體實驗外包服務;

二、細胞株/係服務
       細胞株/係培養、增殖、凍存和相關說明書;
       細胞係培養過程的技術指導;
       細胞係培養基、添加劑、血清及相關生長因子、試劑等;

三、iPS細胞
       iPS細胞基礎培養(有滋養層or無滋養層在);
       iPS細胞增殖及冷凍保存;
       iPS基礎培養技術實習;
       新藥及實驗儀器上市前評估;

四、技術外包服務:各類細胞生物學實驗、分子生物學實驗、顯微鏡拍照服務等

五、其他:根據客戶需要定製服務等

序號

產品名稱

貨號

規格

售價

備注

1

培養基1640

icell-0002

500ml

140

 

2

培養基DMEM

icell-0001

500ml

140

 

3

培養基DMEM/F12

icell-0005

500ml

140

 

4

內皮細胞培養基ECMsciencel

icell-0016

500ml

2280

 

5

動物上皮細胞培養基Epicm-a

icell-0015

500ml

1980

 

6

上皮細胞培養基Epicm

icell-0017

500ml

1980

 

7

Mccoy’s 5A 培養基

icell-0011

500ml

160

 

8

MEM培養基

icell-0012

500ml

140

 

9

FBS北美胎牛血清

GIBCO   16000-044

500ml

6800

 

10

FBS墨西哥胎牛血清

10437-028

500ml

5616

 

11

馬血清

gibco.16050122

500ml

1489

 

12

DMSO

sigma-D2650

100ml

1520

 

13

PBS片劑(1000ml)

09-9400-100

100片

4170

 

14

PS雙抗(進口)

15140-122

100ml

452

 

15

胰蛋白酶

25200-072

500ml

665

 

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