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大鼠心肌細胞H9C2該怎麽進行細胞處理?

時間:2020-09-21 瀏覽次數:103

  大鼠心肌細胞H9C2是源自胚胎大鼠心髒的大鼠心肌細胞,具有許多骨骼肌特征。該細胞係中的成肌細胞可以融合形成多核肌管,並對乙酰膽堿刺激作出反應。如果培養基中的血清濃度降低到1%,融合會很快發生。那麽細胞該怎麽處理呢?
 

大鼠心肌細胞H9C2

  1、複蘇細胞:將裝有1ml細胞懸液的冷凍保存管放入37℃水浴中(水麵應低於冷凍保存管的蓋部分)並搖勻並融化,然後將其轉移到裝有4ml培養基的15ml離心管中。並混合均勻。以1000rpm離心4分鍾,棄去上清液,加入1ml培養基並充分吹掃。然後將所有細胞懸浮液轉移至含有5ml培養基的培養瓶中過夜培養。第二天,更換液體並檢查細胞密度。
  2、細胞傳代:如果大鼠心肌細胞H9C2的密度達到80%-90%,則可以進行傳代培養。
  (1)丟棄培養上清液,並用不含鈣或鎂離子的PBS潤濕細胞1-2次。
  (2)在培養瓶中加入2ml消化液(0.25%胰蛋白酶-0.53m培養基),在37℃培養箱中消化1-2分鍾,然後在顯微鏡下觀察細胞的消化情況。如果大多數細胞變圓形並脫落,請迅速將其帶回手術台,輕按培養瓶幾次,然後加入3ml培養基終止消化。
  (3)輕輕吹動後,將其吸出,移入15ml離心管中,以1000rpm離心4分鍾,棄去上清液,加入1ml培養基,並均勻吹掃。
  (4)轉移到製備的含有5ml培養基的t-25燒瓶或含有14ml培養基的t-75燒瓶中。
  3、細胞凍存:大鼠心肌細胞H9C2生長良好時可以冷凍保存。凍結貼壁細胞後,應將其消化並計數。根據細胞傳代方法的1-3步進行消化,並使用血清進行懸浮。直接計數懸浮細胞,離心,重懸血清,並加入DMSO至終濃度10%。加入DMSO後,應迅速混合,並按照每1毫升的量將其分配到冷凍儲存管中。

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