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拿到人肝癌細胞HEPG2後要先這麽處理

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  拿到人肝癌細胞HEPG2後要先這麽處理。
  1、複蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鍾,棄去上清液,補加1-2mL培養基後吹勻。然後將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜(或將細胞懸液加入250px皿中,加入約8ml培養基,培養過夜)。第二天換液並檢查細胞密度。
  2、人肝癌細胞HEPG2細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
  對於貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
  (1)棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
  (2)加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)於培養瓶中,置於37℃培養箱中消化1-2分鍾,然後在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓並脫落,迅速拿回操作台,輕敲幾下培養瓶後加少量培養基終止消化。
  (3)按6-8ml/瓶補加培養基,輕輕打勻後吸出,在1000RPM條件下離心4分鍾,棄去上清液,補加1-2mL培養液後吹勻。
  (4)收到人肝癌細胞後推薦將細胞懸液按1:2的比例分到新的含6ml培養基的新皿中或者瓶中,建議凍存一支備用,後續傳代根據實際情況按1:2到1:5的比例進行。
  人肝癌細胞HEPG2細胞凍存:待細胞生長狀態良好時,可進行細胞凍存。
  下麵T25瓶為例;
  (1)細胞凍存時,棄去培養基後,PBS清洗瓶底1-2次後加入1ml胰酶,細胞變圓脫落後,加入2ml完全培養基終止消化,可使用血球計數板計數。
  (2)1000RPM離心5分鍾去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO至終濃度為10%。加入DMSO後迅速混勻,按每1ml的數量分配到凍存管中,注意凍存管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數目大於1X106個細胞凍存。
  (3)將凍存管置於程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個小時以後轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
 

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