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說說人表皮永生化細胞HACAT的培養步驟

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  說說人表皮永生化細胞HACAT的培養步驟。
  1、複蘇細胞:在37℃水浴中快速搖動裝有1mL細胞懸液的冷凍管融化,加入5mL培養基並充分混合。在1000RPM下離心5分鍾,棄去上清液,加入4-6mL完全培養基並充分吹掃。然後將所有細胞懸浮液添加到培養瓶中,並培養過夜(或將細胞懸浮液添加到6cm皿中)並培養過夜。第二天換培養基,檢查細胞密度。
  2、細胞傳代:如果細胞密度達到80%-90%,則可以傳代培養。
 

人表皮永生化細胞HACAT

  對於貼壁人表皮永生化細胞HACAT ,傳代可參考以下方法:
  (1)棄去培養上清液,並用不含鈣和鎂離子的PBS衝洗細胞1-2次。
  (2)向培養瓶中加入1-2ml消化液(0.25%胰蛋白酶-0.53mMEDTA),將其置於37℃的培養箱中1-2min,然後在顯微鏡下觀察細胞的消化情況,如果大部分細胞旋轉並掉落後,迅速將其帶回手術台,輕敲培養瓶幾次,並加入5ml以上含10%血清的完全培養基終止消化。
  (3)輕輕吹幹細胞,然後將其完全吸出。以1000RPM離心8-10分鍾,棄去上清液,加入1-2mL培養基並充分吹掃。
  (4)加入5-6ml/瓶培養液,然後將細胞懸液分成新的培養皿或瓶,其中裝有5-6ml培養液的比例為1:2至1:5。
  對於懸浮人表皮永生化細胞HACAT,傳代可參考以下方法:
  (1)收集細胞,以1000RPM離心8-10分鍾,棄去上清液,並加入1-2mL培養基吹淨,然後將細胞懸液分成新的培養皿或瓶,其中含有8ml培養基,比例為1:2至1:5。
  (2)可以選擇一半的介質更換方法。丟棄一半培養基後,懸浮剩餘的細胞,然後將細胞懸浮液分成新的含有8ml培養基的細胞懸浮液,比例為1:2至1:3。在盤子或瓶子裏。
  3、細胞凍存:當細胞生長良好時,可以將其冷凍保存。將貼壁細胞冷凍保存後,棄去培養基並加入少量胰蛋白酶。細胞變成圓形並脫落後,通過離心收集它們。

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