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你真的了解人臍靜脈細胞HUVEC實驗步驟嗎?

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  人臍靜脈細胞HUVEC是一種來源於臍帶組織的幹細胞。它是臍靜脈的重要細胞之一,在理論上可以無限期地通過。因此,人臍靜脈內皮細胞(HUVEC)經常用於血管內皮細胞實驗,而不是靜脈內皮細胞或動脈內皮細胞。臍靜脈內皮細胞易於獲得且來源充足,因此,臍靜脈內皮細胞經常用於血管內皮研究。那麽,您真的了解它的培養實驗步驟嗎?
 

人臍靜脈細胞HUVEC

  1、將15-20cm長的新生兒臍帶儲存在無菌PBS溶液中。(注意:應在4℃下保存24小時,在室溫下保存不超過6小時,否則將被丟棄。)
  2、將鈍針插入臍靜脈管,並用無菌PBS溶液衝洗3-5次,直到將髒血洗淨為止。
  3、用手術鉗夾住臍帶下端,添加15ml膠原酶(1mg/ml)在室溫下消化15-20分鍾,並不時搖動臍帶。
  4、消化後,鬆開下部的手術鉗,將消化液倒入50ml無菌離心管中,並用無菌PBS溶液衝洗臍帶2-3次。
  5、離心收集的液體(2000rpm)3分鍾。
  6、除去上清液,加入10mlM199培養基(添加10u/mlbFGF),用肘部吹動細胞,將所有液體轉移到裝有明膠的培養瓶中,並在37℃下培養。(注:在每個培養瓶中加入3-4ml無菌1%明膠溶液,充分搖動以使明膠溶液完全覆蓋瓶底,並在37℃下孵育至少2小時。使用前將明膠溶液倒入。明膠塗層有助於細胞粘附。)
  7、將人臍靜脈細胞HUVEC培養24小時後,倒出培養基並用無菌PBS溶液洗滌2-3次。洗去紅細胞和死細胞,並加入10ml新鮮的M199培養基。
  8、應每2天更換一次介質(每次應更換2/3的介質)。
  9、培養5-7天後,細胞可以生長到80-90%的單層,然後可以傳代。
  10、倒出培養基,用無菌PBS溶液洗滌2-3次,添加2-3ml消化液(0.25%胰蛋白酶+0.1%EDTA)消化細胞。在顯微鏡下觀察。一旦細胞變圓,添加2-3次含血清的DMEM培養基以終止反應。
  11、用彎頭吹幹細胞,然後將消化的細胞以2000rpm的速度轉移到50ml無菌離心管中3分鍾。
  12、倒出上清液,加入10ml新鮮培養基。通常,可以在一瓶中傳代3-4瓶細胞,然後據此傳代培養。
  13、人臍靜脈細胞HUVEC通常傳代2-3代(約20天)用於各種實驗。

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