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你知道人胚腎細胞293T是怎麽培育出來的嗎?

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  人胚腎細胞293T的培養需要準備DMEM-H培養基,90%;優質胎牛血清,10%。也可根據實驗需要選擇懸浮培養基,使293T細胞懸浮生長。
  1、培養條件:氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。溫度:37攝氏度,培養箱濕度為70%-80%。
  2、凍存液:90%完全培養基,10%DMSO,現用現配。液氮儲存。
  3、複蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鍾,棄去上清液,補加1-2mL培養基後吹勻。然後將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜或將細胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養基,培養過)。第二天換液並檢查細胞密度。
  4、細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
 

人胚腎細胞293T

  如果在人胚腎細胞293T培養過程中出現貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
  1、棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
  2、加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mMEDTA)於培養瓶中,置於37℃培養箱中消化1-2分鍾,然後在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓並脫落,迅速拿回操作台,輕敲幾下培養瓶後加少量培養基終止消化。
  3、按6-8ml/瓶補加培養基,輕輕打勻後吸出,在1000RPM條件下離心4分鍾,棄去上清液,補加1-2mL培養液後吹勻。
  4、將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
  5、細胞凍存:待細胞生長狀態良好時,可進行細胞凍存。貼壁細胞凍存時,棄去培養基後加入少量胰酶,細胞變圓脫落後,加入約1ml含血清的培養基後加入凍存管中,再添加10%DMSO後進行凍存。
  在人胚腎細胞293T培養過程中,需要注意以下兩個事項:
  1.收到細胞後,若發現幹冰已揮發幹淨、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有汙染,請立即與绿巨人全网最好的破解app聚合平台聯係。
  2.所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全台內操作,並請注意防護,所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌後方能丟棄。

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